新型冠狀病毒核衣殼蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

Nucleocapsid Protein Solution Reference Material of Corona Virus Disease 2019 (2019-nCoV)

    新型冠狀病毒核衣殼蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，用于新型冠狀病毒核衣殼蛋白抗原免疫法檢測(cè) 的量值溯源、測(cè)量方法驗(yàn)證評(píng)價(jià)以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。

一、樣品制備

    本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以公布的 NCBI GenBank 中新型冠狀病毒 N 基因（28274-29533 位）為依據(jù)，構(gòu)建包含 N 蛋白全長(zhǎng)的質(zhì)粒，由大腸桿菌重組表達(dá)得到 2019-nCoV 核衣殼重組蛋白，經(jīng)進(jìn)一步純化后得到核衣殼 蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物原料，采用 PBS 緩沖溶液按照比例稀釋后進(jìn)行分裝和定值。

二、溯源性及定值方法

    采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、凝膠排阻液相和反相液相色譜進(jìn)行純度分析，采用基質(zhì)輔助 激光解析串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF）進(jìn)行酶切鑒定，基于氨基酸分析的同位素稀釋質(zhì)譜方法對(duì)緩沖 溶液中核衣殼蛋白的質(zhì)量濃度進(jìn)行測(cè)定，作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值。同位素稀釋質(zhì)譜法是國(guó)際公認(rèn)的潛在基 準(zhǔn)測(cè)量方法，通過(guò)開(kāi)展方法確認(rèn)，以 GBW09237 L-亮氨酸純度和 GBW09235 L-苯丙氨酸純度國(guó)家一級(jí)標(biāo) 準(zhǔn)物質(zhì)為量值溯源參考標(biāo)準(zhǔn)，并使用經(jīng)檢定/校準(zhǔn)的稱(chēng)量等計(jì)量器具，確保本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值溯源至 SI 基 本單位千克（kg）和摩爾（mol）。

三、特性量值及不確定度

    所賦特性量值的不確定度由定值測(cè)量、均勻性和穩(wěn)定性引入的不確定度分量合成得到。本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)密 度為 1.021 g/cm3（t =18°C）,可據(jù)此進(jìn)行體積濃度的換算。

四、均勻性及穩(wěn)定性評(píng)估

    參照 JJF1343 國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范（等效 ISO 指南 35），采用同位素稀釋質(zhì)譜方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均 勻性研究，結(jié)果表明均勻性良好，最小取樣量為 15 μL。采用同位素稀釋質(zhì)譜和高效液相方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了初步穩(wěn)定性研究，參考同類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，有效期暫定至 2020 年 4 月 13 日，研制單位 將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時(shí)通知用戶(hù)。

五、包裝、貯存及使用

    1.包裝規(guī)格：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 0.5mL 帶蓋凍存管包裝，每管 150 μL。

    2.保存和運(yùn)輸條件：置于-70℃冰箱中保存。采用干冰運(yùn)輸，收到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否處于 冰凍狀態(tài)。檢查無(wú)誤才可用于實(shí)驗(yàn)。

    3.使用注意事項(xiàng)：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在 4°C 環(huán)境可穩(wěn)定 1 天，在室溫和 60°C 環(huán)境下不穩(wěn)定，復(fù)融后一次使用， 不可反復(fù)凍融。使用時(shí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)復(fù)溶后應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行稀釋操作，稀釋完成后立即上機(jī)測(cè)定，常溫下的 操作時(shí)間不要超過(guò) 2.5 小時(shí)。對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，推薦使用 PBS 緩沖溶液作為稀釋劑。

六、合作者   

    由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所（廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）為本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制提供構(gòu)建好的表達(dá)菌株，南京金斯瑞生物科技公司完成蛋白質(zhì)表達(dá)和純化。

聲明

1．本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)僅供實(shí)驗(yàn)室研究與分析測(cè)試工作使用。因用戶(hù)使用或儲(chǔ)存不當(dāng)所引起的投訴，不予承擔(dān)責(zé)任。

2．收到后請(qǐng)立即核對(duì)品種、數(shù)量和包裝，相關(guān)賠償只限于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身，不涉及其他任何損失。

3．僅對(duì)加蓋“中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)專(zhuān)用章”的完整證書(shū)負(fù)責(zé)。請(qǐng)妥善保管此證書(shū)。

4．如需獲得更多與應(yīng)用有關(guān)的信息，請(qǐng)與技術(shù)咨詢(xún)部門(mén)聯(lián)系。

注：以上信息僅供參考，以產(chǎn)品附帶證書(shū)為準(zhǔn)。