標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一站式采購平臺(tái)
轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 質(zhì)粒分子
Plasmid DNA Containing Genetically Modified NK603 Maize DNA Fragments
轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制可用于轉(zhuǎn)基因玉米、食品和飼料等的定量檢測(cè)、 安全評(píng)價(jià)和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和分析方法驗(yàn)證和評(píng)價(jià)等領(lǐng)域。
一、樣品制備
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是將轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 轉(zhuǎn)化體特異性序列和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段共同構(gòu)建于 pEASY-T3 載體，得到 pNIM-001 質(zhì)粒分子，經(jīng)提取，純化和質(zhì)量檢測(cè)及均勻性初檢合格后稀釋 至（2.40×108）copy/μL 進(jìn)行分裝。
二、溯源性及定值方法
該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NK603 轉(zhuǎn)化體特異性基因片段和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因（zSSIIb）片段拷貝數(shù)比值特性量 值采用測(cè)序法和數(shù)碼 PCR 法定值；轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度特性量值采用同位 素稀釋質(zhì)譜方法和數(shù)碼 PCR 方法定值, 通過使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求的制備方法、測(cè)量方法和 計(jì)量器具，保證其量值溯源性。
三、特性量值及不確定度
1．NK603 轉(zhuǎn)化體特異性基因片段和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因（zSSIIb）片段拷貝數(shù)比值
|
編號(hào) |
測(cè)序比值 |
擴(kuò)展不確定度（k=2） |
PCR 比值 |
擴(kuò)展不確定度（k=2） |
|
BW4015 |
1.00 |
0.04 |
0.97 |
0.09 |
2． 轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度
|
編號(hào) |
標(biāo)準(zhǔn)值（copy/μL） |
擴(kuò)展不確定度（k=2）（copy/μL |
|
BW4015 |
2.40×108 |
0.14×108 |
四、均勻性檢驗(yàn)及穩(wěn)定性考察
按照 JJF1343-2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)要求隨機(jī)抽取樣 品，采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行瓶間均勻性檢驗(yàn)和瓶?jī)?nèi)均勻性檢驗(yàn)，最小取 樣量為 5 μL，結(jié)果表明均勻性良好。
按照先密后疏的原則采實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性考察，標(biāo)準(zhǔn)值無方向性變化并通過平均值一致性檢驗(yàn)，表明穩(wěn)定性良好。
五、包裝、儲(chǔ)存及使用
1.包裝與儲(chǔ)存：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 2mL 立式擰口塑料離心管包裝，每瓶 500μL/瓶；置于-70?C 冰箱中冷凍保存。
2.使用注意事項(xiàng)：使用前應(yīng)先從冰箱內(nèi)取出，待完全溶解后再打開瓶蓋使用。樣品開封后， 應(yīng)盡快恢復(fù)密封狀態(tài)。
3.使用建議：使用本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，按照表 1 進(jìn)行梯度稀釋，然后再采用熒光定 量 PCR 進(jìn)行檢測(cè)，引物和探針序列[1, 2]詳見表 2。
表 1 轉(zhuǎn)基因玉米 NK603 質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)梯度稀釋說明
|
初始濃度
(copy/μL) |
終濃度
(copy/μL) |
轉(zhuǎn)化體特異性基因檢測(cè) a |
內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因
(zSSIIb)
檢測(cè) b |
DNA 緩沖液
(μL) |
質(zhì)粒 DNA (μL) |
稀釋倍數(shù) |
|
2.4×108 |
4.8×106 |
|
|
490 |
10 |
50 |
|
4.8×106 |
2.4×105 |
|
E |
380 |
20 |
20 |
|
2.4×105 |
2.4×104 |
T |
E |
180 |
20 |
10 |
|
2.4×104 |
2.4×103 |
T |
E |
180 |
20 |
10 |
|
2.4×103 |
4.8×102 |
T |
|
200 |
50 |
5 |
|
4.8×102 |
2.4×102 |
T |
E |
100 |
100 |
2 |
|
2.4×102 |
48 |
T |
E |
80 |
20 |
5 |
a T 表示用于測(cè)定轉(zhuǎn)化體特異性基因時(shí)所需的質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋濃度
b E 表示用于測(cè)定內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因基因時(shí)所需的質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋濃度
表 2 外源基因和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的引物及探針序列
|
基因名
稱 |
引物或探針 |
序列信息 (5’-3’) |
擴(kuò)增片段長度
/(堿基) |
|
外源基因 NK603 |
上游引物 |
ATGAATGACCTCGAGTAAGCTTGTTAA |
108 |
|
下游引物 |
AAGAGATAACAGGATCCACTCAAACACT |
||
|
探針 |
FAM-TGGTACCACGCGACAGACTTCCACTC-TAMRA |
||
|
內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因 zSSIIb |
上游引物 |
CTCCCAATCCTTTGACATCTGC |
151 |
|
下游引物 |
TCGATTTCTCTCTTGGTGACAGG |
||
|
探針 |
FAM-AGCAAAGTCAGAGCGCTGCAATGCA -TAMRA |
聲明
1．本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)僅供實(shí)驗(yàn)室研究與分析測(cè)試工作使用，不能作為國家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，開展法制計(jì)量相關(guān)工作。
2．因用戶使用或儲(chǔ)存不當(dāng)所引起的投訴，不予承擔(dān)責(zé)任。
3．收到后請(qǐng)立即核對(duì)品種、數(shù)量和包裝，相關(guān)賠償只限于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身，不涉及其他任何損失。
4．僅對(duì)加蓋“中國計(jì)量科學(xué)研究院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)專用章”的完整證書負(fù)責(zé)。請(qǐng)妥善保管此證書。
5．如需獲得更多與應(yīng)用有關(guān)的信息，請(qǐng)與技術(shù)咨詢部門聯(lián)系。
注：以上信息僅供參考，以產(chǎn)品附帶證書為準(zhǔn)。
轉(zhuǎn)基因玉米NK603質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
編號(hào):GBW10086 規(guī)格:500μL 濃度:3組分
無氨水
編號(hào):BWZ8087-2016 CAS號(hào):7732-18-5
對(duì)氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液
編號(hào):BWB2061-2016 CAS號(hào):63-74-1
水中2-氯乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
編號(hào):BWQ7947-2016 CAS號(hào):107-07-3
氫氧化鉀-異丙醇滴定溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
編號(hào):BWZ8161-2016 CAS號(hào):1310-58-3
鉑鈷色度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
編號(hào):BWR3005-2016 CAS號(hào):/
化學(xué)需氧量(CODCr)溶液...
編號(hào):GBW(E)086353 CAS號(hào):/
通話對(duì)您免費(fèi)，請(qǐng)放心接聽
溫馨提示：
1.手機(jī)直接輸入，座機(jī)前請(qǐng)加區(qū)號(hào) 如13164239859,010-58103778
2.我們將根據(jù)您提供的電話號(hào)碼，立即回電，請(qǐng)注意接聽
3.因?yàn)槟潜唤蟹剑ㄔ拰?duì)您免費(fèi)，請(qǐng)放心接聽
