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轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
Genetically Modified BT63 Rice Seed Powder
轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉系列基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于轉(zhuǎn)基因水稻作物、食品和飼料等的轉(zhuǎn)基因成 分定量檢測、安全評價、實(shí)驗(yàn)室測量質(zhì)量控制及技術(shù)仲裁等。
一、 樣品制備
本系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是將經(jīng)鑒定純度大于 99.9%的非轉(zhuǎn)基因明恢 63 水稻種子和轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種 子冷凍研磨成粉末,并經(jīng)粒徑和水分測定合格后,按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0%、0.5%、1%、2%、5%的比例 將轉(zhuǎn)基因水稻 BT63 種子粉末和非轉(zhuǎn)基因明恢 63 水稻種子粉末進(jìn)行充分混勻后制成。經(jīng)均勻性初檢 合格后,在潔凈環(huán)境條件下分裝。
二、溯源性及定值方法
本系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用重量法將轉(zhuǎn)基因水稻種子粉和非轉(zhuǎn)基因水稻種子粉按照一定質(zhì)量配比得到 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為標(biāo)準(zhǔn)值。采用數(shù)字 PCR 法分別對插入水稻基因組中的外源基因拷貝數(shù)與水稻基因組 中的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的拷貝數(shù)進(jìn)行測量,得出的拷貝數(shù)分?jǐn)?shù)作為參考值。本系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通過使用滿足 計量學(xué)特性要求的制備方法、測量方法和計量器具,保證其量值溯源性。
三、特性量值及不確定度
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編 號 |
名 稱 |
標(biāo)準(zhǔn)值 (質(zhì)量分?jǐn)?shù)) (×10-2) |
擴(kuò)展不確定度 (×10-2) (k=2) |
參考值 (拷貝分?jǐn)?shù)) (×10-2) |
擴(kuò)展不確定度 (×10-2) (k=2) |
|
GBW10070 |
轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) |
0.50 |
0.04 |
0.51 |
0.07 |
|
GBW10071 |
轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) |
1.01 |
0.07 |
1.00 |
0.13 |
|
GBW10072 |
轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) |
2.01 |
0.11 |
1.91 |
0.25 |
|
GBW10073 |
轉(zhuǎn)基因 BT63 水稻種子粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) |
5.03 |
0.35 |
4.31 |
0.58 |
|
—— |
空白 |
<0.08 |
—— |
0.0014 |
0.0015 |
標(biāo)準(zhǔn)值不確定度評定考慮了定值方法、水分測定、均勻性、穩(wěn)定性引入的不確定度分量。
四、均勻性及穩(wěn)定性
按照 JJF1343-2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》,采用納米金標(biāo)記和中子活化分析 方法對該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)研究,最小取樣量 100mg,結(jié)果表明均勻性良好。按照先密后疏 的原則采用數(shù)字 PCR 法對該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性考察研究,標(biāo)準(zhǔn)值無方向性變化并通過平均值一致 性檢驗(yàn),表明穩(wěn)定性良好。
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)自定值日期起,有效期為 7 年,研制單位將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性,有 效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化,將及時通知用戶。
五、包裝、儲存及使用
1.包裝與儲存:本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用棕色玻璃西林瓶包裝,每瓶 1g;置于 4℃冰箱中冷藏保存。
2.使用:使用前應(yīng)先從冰箱內(nèi)取出,平衡至室溫后再打開瓶蓋使用。樣品開封后,應(yīng)盡快恢復(fù) 密封狀態(tài)。 建議用 Promega FF3750 Wizard® Magnetic DNA Purification System for Food (美國普洛麥格公 司)試劑盒提取水稻種子粉末基因組 DNA,再用熒光定量 PCR 進(jìn)行檢測,引物和探針序列[1, 2]詳見 下表。 外源基因和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的引物及探針序列
|
基因名稱 |
引物或探針 |
序列信息 (5’-3’) |
擴(kuò)增片段長度 /(堿基) |
|
外源基因 BT |
上游引物 |
AGAGACTGGTGATTTCAGCGGG |
120 |
|
下游引物 |
GCGTCCAGAAGGAAAAGGAATA |
||
|
探針 |
FAM-ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG-BHQ1 |
||
|
內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因 RBE4 |
上游引物 |
GTTTTAGTTGGGTGAAAGCGGTT |
106 |
|
下游引物 |
CCTGTTAGTTCTTCCAATGCCCTTA |
||
|
探針 |
FAM-AGTATCTATTCCCAACCAGA-MGBNFQ |
聲明
1.本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)僅供實(shí)驗(yàn)室研究與分析測試工作使用。因用戶使用或儲存不當(dāng)所引起的投訴,不予承擔(dān)責(zé)任。
2.收到后請立即核對品種、數(shù)量和包裝,相關(guān)賠償只限于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身,不涉及其他任何損失。
3.僅對加蓋“中國計量科學(xué)研究院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)專用章”的完整證書負(fù)責(zé)。請妥善保管此證書。
4.如需獲得更多與應(yīng)用有關(guān)的信息,請與技術(shù)咨詢部門聯(lián)系。
注:以上信息僅供參考,以產(chǎn)品附帶證書為準(zhǔn)。
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