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轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 質(zhì)粒分子標準物質(zhì)
Plasmid DNA Containing Containing Genetically Modified MON89788 Soybean DNA Fragments
轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 質(zhì)粒分子標準物質(zhì)可用于轉(zhuǎn)基因大豆、食品和飼料等的定量檢測、安全評價、實驗室質(zhì)量控制、方法評價與驗證、技術(shù)仲裁等。
一、樣品制備
本標準物質(zhì)是將轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 轉(zhuǎn)化體特異性序列和內(nèi)標準基因片段共同構(gòu)建于 pEASY-T3 載體,得到 pNIM-004 質(zhì)粒分子,經(jīng)提取,純化和質(zhì)量檢測及均勻性初檢合格后稀釋至 4.02×106copy/μL 進行分裝。
二、溯源性及定值方法
該標準物質(zhì)采用測序法、數(shù)字 PCR 方法對轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 轉(zhuǎn)化體特異性基因片段和大豆 內(nèi)標準基因片斷的拷貝數(shù)比值進行定值測量。測序法測量結(jié)果作為標準物質(zhì)測序比值標準值;數(shù)字 PCR 方法測量結(jié)果作為標準物質(zhì) PCR 比值標準值。本標準物質(zhì)通過使用滿足計量學特性要求的制備 方法、測量方法和計量器具,保證其量值溯源性。
三、特性量值及不確定度
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編 號 |
標準值及不確定度 |
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|
GBW10092 |
測序比值 |
擴展不確定度(%) (k=2) |
PCR 比值 |
擴展不確定度(%) (k=2) |
|
1.00 |
0.04 |
1.01 |
0.09 |
|
標準值不確定度評定考慮了定值方法、均勻性、穩(wěn)定性引入的不確定度分量。
四、均勻性和穩(wěn)定性考察
按照 JJF1343-2012《標準物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學原理》,采用采實時熒光定量 PCR 方法對 該標準物質(zhì)進行均勻性檢驗研究,最小取樣量 5μL,結(jié)果表明均勻性良好。按照先密后疏的原則采用實時熒光定量 PCR 方法對該標準物質(zhì)進行穩(wěn)定性考察研究,標準值無方向性變化并通過平均值一 致性檢驗,表明穩(wěn)定性良好。
本標準物質(zhì)自定值日期起,有效期為 6 年。
五、包裝、儲存及使用
1.包裝與儲存:本標準物質(zhì)采用 2mL 立式擰口塑料離心管包裝,500μL/瓶。建議-70℃ 低溫長期保存。
2.使用注意事項:使用前應先從冰箱內(nèi)取出,平衡至室溫后再打開瓶蓋使用。樣品開封后,應盡快恢復密封狀態(tài)。
3.使用建議:使用本標準物質(zhì)制作標準曲線時,按照表 1 進行梯度稀釋,然后再采用熒光定量 PCR 進行檢測,引物和探針序列詳見表 2。
表 1 轉(zhuǎn)基因大豆 MON89788 質(zhì)粒分子標準物質(zhì)梯度稀釋說明
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初始濃(copy/μL) |
終濃度(copy/μL) |
質(zhì)粒 DNA(μL) |
TE(μL) |
|
4.02×106 |
4.02×105 |
20 |
180 |
|
4.02×105 |
4.02×104 |
20 |
180 |
|
4.02×104 |
4.02×103 |
20 |
180 |
|
4.02×103 |
4.02×102 |
20 |
180 |
|
4.02×102 |
4.02×101 |
20 |
180 |
表 2 外源基因和內(nèi)標準基因的引物及探針序列
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基因名稱 |
引物或探針 |
序列信息 (5’-3’) |
擴增片段長度 /(堿基) |
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外源基因 MON89788 |
上游引物 |
TCCCGCTCTAGCGCTTCAAT |
139 |
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下游引物 |
TCGAGCAGGACCTGCAGAA |
|||
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探針 |
FAM-CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTG-TAMRA |
|||
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內(nèi)標準基因 Lec |
上游引物 |
CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC |
74 |
|
|
下游引物 |
GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC |
|||
|
探針 |
FAM-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-TAMRA |
|||
聲明
1.本標準物質(zhì)僅供實驗室研究與分析測試工作使用。因用戶使用或儲存不當所引起的投訴,不予承擔責任。
2.收到后請立即核對品種、數(shù)量和包裝,相關(guān)賠償只限于標準物質(zhì)本身,不涉及其他任何損失。
注:以上信息僅供參考,以產(chǎn)品附帶證書為準。
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