維生素[U1] B12是含鈷的有機(jī)藥物，為深紅色結(jié)晶，又稱為紅色維生素B12或氰鈷胺，是唯一含有主要礦物質(zhì)的維生素。測(cè)定維生素B12片劑含量的傳統(tǒng)方法是運(yùn)用紫外可見分光光度計(jì)，以吸光系數(shù)法為測(cè)定含量依據(jù)，但是該方法對(duì)儀器精密度要求較高。標(biāo)準(zhǔn)曲線法是紫外可見分光光度法中最經(jīng)典的方法，若認(rèn)定一臺(tái)儀器，固定[U2] 其工作狀態(tài)和測(cè)定條件，則該方法可消除因儀器而產(chǎn)生的一些誤差，且操作簡(jiǎn)便易行。本文利用紫外可見分光光度計(jì)，建立了維生素B12片劑含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，并利用該方法對(duì)山西亨瑞達(dá)制藥有限公司生產(chǎn)的維生素B12片劑的5個(gè)不同批號(hào)進(jìn)行了V-B12的含量測(cè)定，方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好。

1  儀器與試藥

1.1  儀器

754型紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

1.2  試藥

維生素B12對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所）；維生素B12片劑（山西亨瑞達(dá)制藥有限公司，批號(hào)060801，060701，061002，060902，070303）。0.8濾膜［AUTOMATIC SCIENCE（TIANJIN） INSTRUMENT CO；LTD］。

2  方法與結(jié)果

2.1  測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

維生素B12吸收光譜上有三個(gè)吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。維生素B12在361 nm的吸收峰干擾因素少，吸收又最強(qiáng)，中國藥典規(guī)定以361 nm處吸收峰的比吸光系數(shù)E1%1 cm值（207）為計(jì)算含量依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)選擇361 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法為計(jì)算含量依據(jù)。

2.2  溶液的制備

2.2.1  對(duì)照品溶液的制備

精密稱定對(duì)照品維生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。將溶解后的溶液放置冰箱中冷藏備用。

2.2.2  供試品溶液的制備

維生素B12片劑為糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈現(xiàn)粉紅色，研細(xì)，精密稱定研磨樣品，約相當(dāng)于維生素B12 1.25 mg(每片的標(biāo)示量為25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振搖30 min使其溶解，加水稀釋至刻度，密塞，再用力振搖10 min，靜置，取上清液，用0.8 μm的微孔濾膜濾過，濾液放置冰箱中冷藏備用。

2.3  線性關(guān)系

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精取2.2.1項(xiàng)下的儲(chǔ)備液，用水分別按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀釋，搖勻。在361 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

以吸光度A與質(zhì)量濃度c繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。結(jié)果表明維生素B12對(duì)照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與吸收程度呈良好的線性關(guān)系。

2.4  精密度試驗(yàn)

精取濃度為100 μg/mL的對(duì)照品溶液在361 nm連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得維生素B12的平均吸光度為2.087，RSD為0.7%（n=5）。RSD數(shù)值較小，說明該方法精密度好。

2.5  穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7項(xiàng)下含量測(cè)定法測(cè)定，計(jì)算得平均吸光度為0.468，RSD為0.99%（n=5）。結(jié)果表明供試品溶液在冷藏溫度下24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6  重復(fù)性試驗(yàn)

精取同一批號(hào)樣品，分別按2.2.2項(xiàng)的方法制備一式5份的供試品溶液，按2.7項(xiàng)下含量測(cè)定法測(cè)定，計(jì)算得維生素B12的平均含量為22.6 μg/mL（批號(hào)為070303），RSD為 1.08%（n=5），說明該方法有較好的重復(fù)性。

2.7  含量測(cè)定

以水為空白，取2.2.2項(xiàng)下的濾液，搖勻，設(shè)定吸收波長(zhǎng)為361 nm測(cè)定吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法為計(jì)算含量依據(jù)。

維生素B12片劑的標(biāo)示量為25.0 μg，由以上測(cè)定結(jié)果可知，山西亨瑞達(dá)制藥有限公司生產(chǎn)的維生素B12片劑含量均在標(biāo)示范圍90.0%～110.0%之內(nèi)。RSD較小，說明該廠生產(chǎn)的藥品含量穩(wěn)定。

3  討論

3.1.  維生素B12主要來源是動(dòng)物性食物，存在于動(dòng)物肝臟、牛肉、豬肉、蛋、牛奶和奶酪中。在吸收時(shí)需與鈣結(jié)合才能有利于人體的機(jī)能活動(dòng)。維生素B12能促進(jìn)紅血球的形成和再生，防止貧血；促進(jìn)兒童發(fā)育，增進(jìn)食欲；增強(qiáng)體力；維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能；促使注意力集中，增強(qiáng)記憶力與平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)適宜地為體內(nèi)所利用。維生素B12為細(xì)胞分裂和維持神經(jīng)組織髓鞘完整所必須。主要用于治療惡性貧血，與葉酸合用治療因抗葉酸藥、脂肪瀉等引起的巨幼紅細(xì)胞性貧血。也用于多發(fā)性神經(jīng)炎、肝炎、肝硬化、白細(xì)胞減少癥等的輔助治療，目前療效有爭(zhēng)議?？诜S生素B12僅用于已證實(shí)維生素B12吸收正常的營(yíng)養(yǎng)性維生素B12缺乏。

3.2  本實(shí)驗(yàn)采取紫外可見分光光度法考察了片劑維生素B12的含量，將對(duì)照品按不同比例用水稀釋，在361 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外可見吸收測(cè)定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。將維生素B12片劑研磨，精密稱定并加水溶解，利用微孔濾膜過濾得到濾液，作為供試品溶液。利用該方法得到的樣品溶液，按中國藥典規(guī)定波長(zhǎng)361 nm測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法為測(cè)定含量依據(jù)，結(jié)果表明，經(jīng)紫外可見吸收測(cè)定，所測(cè)片劑含量均在標(biāo)示范圍之內(nèi)。

3.3  本實(shí)驗(yàn)需避光操作。維生素B12片劑為糖衣片，呈水溶性，除去糖衣時(shí)要刮凈，研細(xì)，減小干擾，使溶解度增高。

3.4  因紫外可見分光光度法所需樣品量少，本實(shí)驗(yàn)采用注射器過濾器進(jìn)行過濾，得到供試品溶液。

3.5  本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高，可作為測(cè)定維生素B12片劑含量的方法。

相關(guān)鏈接：維生素B12，氰鈷胺，葉酸，白細(xì)胞，血紅蛋白，維生素，北納生物

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