乙二胺四乙酸二鈉又名依地酸二鈉，是一種重要絡(luò)合劑，用于化學(xué)電鍍及用作洗滌劑、凈水劑、pH調(diào)節(jié)劑、阻凝劑等。乙二胺四乙酸二鈉在注射劑中用作穩(wěn)定劑，其原理為乙二胺四乙酸二鈉與金屬離子形成穩(wěn)定的水溶性螯合物，能夠防止自身氧化，有利于提高藥物在制備、存儲和臨床配制過程中的穩(wěn)定性。

乙二胺四乙酸二鈉可對粘膜、上呼吸道、眼睛及皮膚產(chǎn)生刺激作用，長期大量應(yīng)用乙二胺四乙酸二鈉超標(biāo)的產(chǎn)品可能對人體健康產(chǎn)生不良影響。乙二胺四乙酸二鈉還可與鈣離子結(jié)合成可溶的絡(luò)合物，降低血鈣濃度從而引起低鈣血癥。因此注射劑中應(yīng)控制乙二胺四乙酸二鈉的含量。

碳酸氫鈉注射液收載于《中國藥典》2015 年版二部中，臨床上用于治療代謝性酸中毒，堿化尿液，作為制酸藥治療胃酸過多引起的癥狀，以及用于治療某些藥物（如巴比妥類、水楊酸類藥物及甲醇等）中毒。乙二胺四乙酸二鈉在碳酸氫鈉注射液中用作穩(wěn)定劑，而碳酸氫鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對乙二胺四乙酸二鈉的含量進(jìn)行控制，碳酸氫鈉注射液中乙二酸四乙酸二鈉含量測定方法尚未見報道。

目前，其它介質(zhì)中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法有滴定法、氣相色譜法、高效液相色譜法和液相色譜 – 串聯(lián)質(zhì)譜法等。滴定法測定誤差大，操作繁瑣，需要基準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)定；氣相色譜法樣品前處理需采用有機(jī)溶劑提取或柱前衍生，處理復(fù)雜；液相色譜 – 串聯(lián)質(zhì)譜法測定成本較高。

筆者分別采用紫外分光光度法、高效液相色譜法測定碳酸氫鈉注射液中的乙二胺四乙酸二鈉，對兩種分析方法進(jìn)行對比，結(jié)果表明紫外分光光度法測量低濃度的乙二胺四乙酸二鈉準(zhǔn)確度較低。而選擇葡聚糖凝膠 G–10 色譜柱，以水為流動相，采用高效液相色譜法測定，與其它方法相比，該方法操作簡單，分析快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好，檢測成本低，有助于準(zhǔn)確控制碳酸氫鈉注射液中乙二胺四乙酸二鈉的含量。

1　實驗部分

1.1　主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1260 型；

電子天平：BT125D 型；

乙二胺四乙酸二鈉對照品：分析純，純度大于98%；

乙二胺四乙酸二鈉對照品溶液：175.8 μg／mL，精密稱取 8.79 mg 的乙二胺四乙酸二鈉對照品，置于50 mL 容量瓶中，用水溶解并稀釋至標(biāo)線；

碳酸氫鈉注射液樣品：（1）批號為 11801242， （2）批號分別為 050812，050911；

實驗用水為高純水。

1.2　色譜條件

色譜柱：Sephadex G–10 型葡聚糖凝膠色譜柱（300 mm×10.0 mm）；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：250 nm ；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10 μL ；流動相：水，流量為 1.0mL／min。

1.3　實驗方法

采用直接進(jìn)樣，以色譜峰面積外標(biāo)法定量。

2　結(jié)果與討論

2.1　色譜條件的選擇

2.1.1　色譜柱

碳酸氫鈉注射液的 pH 值為 7.8~8.5，常用的ODS 色譜柱耐 pH 范圍為 2~8，不適合用于碳酸氫鈉注射液的分析。Sephadex G–10 型葡聚糖凝膠色譜柱（300 mm×10.0 mm）耐 pH 范圍為 1~14，柱容量大，采用純水作為流動相，分析速度快，特別適合碳酸氫鈉注射液中乙二胺四乙酸二鈉的分析。

2.1.2　流動相及流量

分別采用甲醇 – 水、乙腈 – 水、水為流動相進(jìn)行試驗，結(jié)果表明采用水為流動相能夠滿足測試要求，且水具有環(huán)保優(yōu)勢，易于獲得。

流動相流量分別設(shè)定 0.8，1.0，1.20 mL／min 進(jìn)行試驗，結(jié)果表明采用流量 1.0 mL／min 能夠達(dá)到很好的分析效果。

2.1.3　分析波長

采用水作為溶劑，分別對 175.8 μg／mL 乙二胺四乙酸二鈉溶液、768μg／mL 碳酸氫鈉溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果表明，碳酸氫鈉溶液在200～240 nm 波長處有吸收，乙二胺四乙酸二鈉溶液在 200～260 nm 波長處有吸收（如圖 1）。為了避免碳酸氫鈉吸收干擾，乙二胺四乙酸二鈉的分析波長選擇為 250 nm。

2.2　樣品色譜圖

取碳酸氫鈉注射液樣品，按照 1.2 色譜條件測定其中乙二胺四乙酸二鈉的含量，樣品色譜圖如圖2。由圖2可見，乙二胺四乙酸二鈉色譜無基體干擾，色譜峰形對稱，可準(zhǔn)確定量。

2.3　線性方程和檢出限

分別精密吸取 175.8 μg／mL 的乙二胺四乙酸二鈉對照品溶液 1，10，20，50，100 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，以色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)、乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量（x，µg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量在 0.175 8～17.58 µg 的范圍內(nèi)與色譜峰面積線性良好，線性方程為 y=0.002 5x–0.915 1，相關(guān)系數(shù)為 0.999 1。

不斷稀釋標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，測得 3 倍信噪比對應(yīng)的溶液濃度作為方法檢出限，得檢出限為 6.31 μg／L。

2.4　精密度試驗

取同一批號的乙二胺四乙酸二鈉樣品溶液 6份，按 1.2 色譜條件測定，測定結(jié)果列于表 2。由表2 可知，乙二胺四乙酸二鈉含量測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.89%(n=6)，表明本方法精密度良好。

2.5　穩(wěn)定性試驗

取同一樣品溶液，按照 1.2 色譜條件，分別在取樣 0，3，6，9，12 h 后進(jìn)樣測定，色譜峰面積測定結(jié)果列于表 3。由表 3 可知，色譜峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.86%，表明測定值在 12 h 內(nèi)基本一致，該方法穩(wěn)定性良好。

2.6　加標(biāo)回收試驗

精密吸取已知含量的乙二胺四乙酸二鈉樣品 9份，每份 1 mL，分別精密加入 0.10 mg／mL 乙二胺四乙酸二鈉溶液 0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2 mL，按照 1.2 色譜條件進(jìn)行測定，計算乙二胺四乙酸二鈉的回收率，結(jié)果見表 4。

由表 4 可知，9 份乙二胺四乙酸二鈉的平均回收率為 97.26%，表明該方法準(zhǔn)確度較高。

3　結(jié)語

高效液相色譜法是應(yīng)用較廣泛的一種測定乙二胺四乙酸鈉的方法?，F(xiàn)有高效液相色譜法均采用C 18 色譜柱，流動相多含有有機(jī)溶劑和鹽類緩沖溶液，有機(jī)溶劑會導(dǎo)致環(huán)境污染，而長時間使用緩沖鹽會降低色譜柱的性能，檢測成本較高。本高效液相色譜法測定碳酸氫鈉注射劑中的乙二胺四乙酸鈉，選擇水為流動相，方法簡單，檢測方法環(huán)保，有推廣價值。