對乙酰氨基酚 ( 俗稱撲熱息痛 )，是一種類阿司匹林的解熱鎮(zhèn)痛藥，可用于治療感冒發(fā)燒，也可用于緩解疼痛，如頭痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、肌肉痛、牙痛、手術(shù)痛等。因其副作用小，療效快，是常用感冒退燒藥的主要成分，尤其廣泛用于兒童藥中。對乙酰氨基酚原料藥純度直接影響其制劑的藥效，因此嚴格檢測和控制對乙酰氨基酚原料藥純度具有重要意義。目前，測定對乙酰氨基酚純度的方法主要是《中國藥典》2015 年版第二部中采用的紫外可見分光光度法。也有檢測人員用高效液相 (HPLC) 法進行定量分析。上述兩種方法都需要標準品，且需要配制標準溶液，前期準備工作復雜，操作時間長，且產(chǎn)生廢液試劑，造成浪費和環(huán)境污染。

差示掃描量熱 (DSC) 法是 20 世紀 60 年代初發(fā)展起來的一種熱分析技術(shù)。20 世紀 80 年代逐漸發(fā)展成熟，并廣泛用于藥物分析領域。DSC 法具有樣品用量少、制樣簡便、檢測速度快、無需其它試劑和對照品等優(yōu)點。另外，DSC 技術(shù)還可以同時測定藥品的熔點、熔融焓等物理化學性質(zhì)。1980 年，《美國藥典》正式將 DSC 作為藥品純度的檢測方法之一。近年來，國內(nèi)用 DSC 測定藥物純度的研究也日益增加，郭永輝等采用 DSC 測定了沙呵啶的純度，并用高效液相 (HPLC) 法進行了對比，發(fā)現(xiàn) DSC 法與 HPLC 法測定結(jié)果具有良好的一致性。王娟等用 DSC 法同時測定了衣康酸的純度與熔點，結(jié)果表明 DSC 法測定的純度比傳統(tǒng)的碘量法誤差小，準確度高。筆者采用 DSC 法測定了對乙酰氨基酚的純度，并用紫外可見分光光度法對測定結(jié)果的準確性進行了驗證。結(jié)果表明，DSC 法的測定結(jié)果與紫外可見分光光度法的測定結(jié)果基本一致，且DSC 法測定結(jié)果的相對標準偏差較小。該方法的建立為對乙酰氨基酚原料藥純度檢測和質(zhì)量監(jiān)控提供了一種更加簡便、快速的分析方法。

1　實驗部分

1.1　主要儀器與試劑

差示掃描量熱儀：Q2000 型，帶有 50 位自動進樣器；

電子天平： XP6 型，感量為 0.001 mg；

紫外可見分光光度計：Cary 60 型；

移液槍：熱電 F1 型，量程為 1～10 mL；

鋁坩堝 ( 帶蓋 ) ：Tzero 密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)；

石英吸收池：1 cm×1 cm；

容量瓶：50，1 000 mL；

銦標準物質(zhì)：熔點為 (156.52±0.26)℃ (k=2)，編號為 GBW(E) 130182；

藍寶石：樣品為無色，參比為紅色；

對乙酰氨基酚標準品：純度不小于 99.5%；

對乙酰氨基酚原料藥：純度大于 99%；

氫氧化鈉：分析純。

1.2　溶液配制

對乙酰氨基酚系列標準工作溶液：準確稱取50.0 mg 對乙酰氨基酚標準品，用質(zhì)量分數(shù)為 0.4%的氫氧化鈉溶液溶解，并定容至 1 000 mL，搖勻。用移液槍分別移取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL 上述溶液于 50 mL 容量瓶中，用 0.4% 氫氧化鈉溶液定容至標線，搖勻，配制成對乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度分別為 1，2，4，6，8，10 μg／mL 的系列標準工作溶液。避光保存。

對乙酰氨基酚樣品溶液：5 μg／mL，精確稱取對乙酰氨基酚樣品5.0 mg，置于1 000 mL容量瓶中，用 0.4% 氫氧化鈉溶液溶解，并定容至標線，搖勻。

1.3　儀器工作條件

（1）差示掃描量熱儀。爐體氣氛：高純氮氣 (N2的體積分數(shù)不小于 99.99%)，流量為 50 mL／min ；稱樣量：2.0～2.2 mg ；升溫速率：1.0℃／min ；升溫區(qū)間：150～180℃；冷卻裝置：機械冷卻。

（2）紫外可見分光光度計。開機，預熱 10 min，儀器自檢完成后，即可進行測試。

1.4　實驗方法

1.4.1 DSC 儀器校準

（1）爐子熱電阻、電容的校準。用高純 N2 吹掃爐體，流量為 50 mL／min，在 –90～400℃范圍內(nèi)，分別以 10℃／min 速率升溫，檢測空爐子和藍寶石的DSC 曲線，實驗完成后，軟件自動校準爐子熱電阻和電容，以消除因參比和樣品傳感絲熱電阻和電容的差別引起的實驗誤差。

（2）溫度和爐子常數(shù)校準。稱取銦標準物質(zhì)(5.0±0.01) mg，置于 DSC 鋁坩堝中，參比為空坩堝。用高純 N2 吹掃爐子，流量為 50 mL／min，在100～180℃范圍內(nèi)，以 10℃／min 速率升溫，測定銦的熔化曲線。測試完成后，軟件自動校準儀器溫度和爐子常數(shù)。

1.4.2　對乙酰氨基酚純度測定

稱取 2.0～2.2 mg 樣品于坩堝中，經(jīng)壓樣器壓樣后，按一定次序置于自動進樣器的樣品盤中，采用與樣品坩堝相同類型的空坩堝為參比盤，自動進樣器按照設定的程序依次將樣品與參比送入加熱爐中進行測定。實驗程序：用高純 N2 吹掃爐子，流量為 50 mL／min，快速升溫至 150℃，恒溫 2 min ，然后以 1.0℃／min 升溫至 180℃ ( 對乙酰氨基酚熔程為 168～172℃ )。測試完成后，通過 TA 儀器公司的universal 軟件自動計算其純度。

2　結(jié)果與討論

2.1　升溫速率與稱樣量的選擇

升溫速率和稱樣量是 DSC 法測定藥品純度的主要影響因素。分別設置 4 個水平條件的升溫速率 (0.5，1.0，2.0，4.0℃／min) 和 4 個水平條件的稱樣量 (1.0～1.2，2.0～2.2，3.0～3.2，4.0～4.2 mg)，在不同水平組合條件下，按 1.4.2 實驗方法對樣品進行測定，考察不同升溫速率與稱樣量對測定結(jié)果的影響，結(jié)果見表 1 和圖 1。

圖 1(a) 為稱樣量為 2.0～2.2 mg 時，不同升溫速率的 DSC 曲線對比圖，從圖中可以看出，升溫速率越大，樣品與爐體間的熱滯后越明顯，樣品熔融峰越寬，且峰發(fā)生變形 ( 如 4.0℃／min)，影響測定結(jié)果的準確性；升溫速率過低，不但延長測定時間，且基線波動引起的實驗誤差變大。綜合考慮實驗結(jié)果的準確性和測定時間，選擇升溫速率為 1.0℃／min。 圖 1(b) 為升溫速率為 1.0℃／min 時，不同稱樣量的DSC 曲線對比圖，從圖中可以看出，稱樣量對熔融峰形和測試結(jié)果的準確度及精密度影響不明顯。但稱樣量太少，稱量誤差明顯；稱樣量太多，影響樣品內(nèi)部熱傳導速度及溫度梯度，導致分辨率下降，且造成浪費。因此在保證準確度的前提下，盡量減少稱樣量。最終選擇實驗條件：稱樣量為 2.0～2.2 mg，升溫速率為 1.0℃／min。

2.3　坩堝類型選擇

不同坩堝作為樣品盤，也會對測定結(jié)果產(chǎn)生一定影響。分別選用 TA 公司的 Tzero 密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)、Tzero 非密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)、普通非密封鋁坩堝 (Φ6.65×1.7 mm) 和普通密封鋁坩堝 (Φ6×2.5 mm) 作為樣品盤，稱取 2.0～2.2 mg 對乙酰氨基酚樣品，對應的空坩堝為參比盤，在升溫速率為 1.0℃／min 條件下進行測定，結(jié)果見表2 和圖 2。

由圖 2 可以看出，4 種不同類型坩堝作為樣品盤測定的對乙酰氨基酚的熔融峰形無顯著差異。但用非密封盤測得的樣品純度比密封盤高，且用非密封盤測得的熔融焓偏高，可能是由于采用密封盤時，整個測定過程在密封環(huán)境中進行，抑制了揮發(fā)性物質(zhì)的揮發(fā)。采用非密封盤時，少量揮發(fā)性雜質(zhì)在揮發(fā)過程中產(chǎn)生汽化熱，導致所測的熔融焓偏高。為消除汽化熱的干擾，選擇 Tzero 密封鋁盤作為樣品盤。

2.4　線性關(guān)系

精確稱取 6 份不同質(zhì)量 (1.0～4.0 mg) 的對乙酰氨基酚樣品，按 1.4.2 方法對樣品進行測定，結(jié)果見表 3。由表 3 可知，6 份對乙酰氨基酚樣品的純度平均值為 99.92%，測定結(jié)果的相對標準偏差為 0.05%。以對乙酰氨基酚稱樣量 (x) 為橫坐標，以熔融熱 (y)( 熔融焓 × 稱樣量 ) 為縱坐標，繪制標準工作曲線。計算得線性方程為 y=181.52x+0.340 2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。表明在對乙酰氨基酚稱樣量為1.0～4.0 mg 范圍內(nèi)與熔融熱成良好的線性關(guān)系。

2.5　精密度試驗

精確稱取 6 份對乙酰氨基酚樣品 (2.0～2.2 mg)，按 1.4.2 方法對樣品進行測定，結(jié)果見表 4。

由表 4 可知，測定結(jié)果的相對標準偏差為0.03%，表明 DSC 法測定對乙酰氨基酚純度具有良好的精密度。

2.3　方法比對試驗

按照文獻和《中國藥典》，采用紫外可見分光光度法測定對乙酰氨基酚系列標準工作溶液在257 nm 處的吸光度。以對乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度(x) 為橫坐標，以吸光度 (y) 為縱坐標，繪制標準工作曲線。計算得線性方程為 y=0.078 6x–0.007 78，相關(guān)系數(shù) r=0.999 9。分別對樣品溶液進行 3 次平行測定，由線性方程計算得對乙酰氨基酚純度分別為99.83%，99.94%，99.79%，平均值為 99.85%，測定結(jié)果的相對標準偏差為 0.08%。由此可見，DSC 法與紫外可見分光光度法測定的對乙酰氨基酚純度具有較好的一致性，且 RSDDSC ＜ RSDUV。

3　結(jié)語

采用差示掃描量熱法測定了對乙酰氨基酚原料藥的純度，考察了實驗條件對測定結(jié)果的影響，并用紫外可見分光光度法進行了對比。結(jié)果表明，DSC 法具有精密度、準確度、重現(xiàn)性高等優(yōu)點，且樣品用量少，操作簡便，不會造成溶劑浪費。DSC 法與紫外可見分光光度法測得的對乙酰氨基酚的純度基本一致，且 DSC 法測定結(jié)果的相對標準偏差較小。該方法的建立為對乙酰氨基酚原料藥純度檢測和質(zhì)量監(jiān)控提供了一種更加簡便、快速的分析方法，并為其它原料藥純度的檢測和質(zhì)量監(jiān)控提供參考。