對(duì)乙酰氨基酚 ( 俗稱撲熱息痛 )，是一種類阿司匹林的解熱鎮(zhèn)痛藥，可用于治療感冒發(fā)燒，也可用于緩解疼痛，如頭痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、肌肉痛、牙痛、手術(shù)痛等。因其副作用小，療效快，是常用感冒退燒藥的主要成分，尤其廣泛用于兒童藥中。對(duì)乙酰氨基酚原料藥純度直接影響其制劑的藥效，因此嚴(yán)格檢測(cè)和控制對(duì)乙酰氨基酚原料藥純度具有重要意義。目前，測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚純度的方法主要是《中國(guó)藥典》2015 年版第二部中采用的紫外可見(jiàn)分光光度法。也有檢測(cè)人員用高效液相 (HPLC) 法進(jìn)行定量分析。上述兩種方法都需要標(biāo)準(zhǔn)品，且需要配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，前期準(zhǔn)備工作復(fù)雜，操作時(shí)間長(zhǎng)，且產(chǎn)生廢液試劑，造成浪費(fèi)和環(huán)境污染。

差示掃描量熱 (DSC) 法是 20 世紀(jì) 60 年代初發(fā)展起來(lái)的一種熱分析技術(shù)。20 世紀(jì) 80 年代逐漸發(fā)展成熟，并廣泛用于藥物分析領(lǐng)域。DSC 法具有樣品用量少、制樣簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快、無(wú)需其它試劑和對(duì)照品等優(yōu)點(diǎn)。另外，DSC 技術(shù)還可以同時(shí)測(cè)定藥品的熔點(diǎn)、熔融焓等物理化學(xué)性質(zhì)。1980 年，《美國(guó)藥典》正式將 DSC 作為藥品純度的檢測(cè)方法之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)用 DSC 測(cè)定藥物純度的研究也日益增加，郭永輝等采用 DSC 測(cè)定了沙呵啶的純度，并用高效液相 (HPLC) 法進(jìn)行了對(duì)比，發(fā)現(xiàn) DSC 法與 HPLC 法測(cè)定結(jié)果具有良好的一致性。王娟等用 DSC 法同時(shí)測(cè)定了衣康酸的純度與熔點(diǎn)，結(jié)果表明 DSC 法測(cè)定的純度比傳統(tǒng)的碘量法誤差小，準(zhǔn)確度高。筆者采用 DSC 法測(cè)定了對(duì)乙酰氨基酚的純度，并用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，DSC 法的測(cè)定結(jié)果與紫外可見(jiàn)分光光度法的測(cè)定結(jié)果基本一致，且DSC 法測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小。該方法的建立為對(duì)乙酰氨基酚原料藥純度檢測(cè)和質(zhì)量監(jiān)控提供了一種更加簡(jiǎn)便、快速的分析方法。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　主要儀器與試劑

差示掃描量熱儀：Q2000 型，帶有 50 位自動(dòng)進(jìn)樣器；

電子天平： XP6 型，感量為 0.001 mg；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：Cary 60 型；

移液槍：熱電 F1 型，量程為 1～10 mL；

鋁坩堝 ( 帶蓋 ) ：Tzero 密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)；

石英吸收池：1 cm×1 cm；

容量瓶：50，1 000 mL；

銦標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：熔點(diǎn)為 (156.52±0.26)℃ (k=2)，編號(hào)為 GBW(E) 130182；

藍(lán)寶石：樣品為無(wú)色，參比為紅色；

對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于 99.5%；

對(duì)乙酰氨基酚原料藥：純度大于 99%；

氫氧化鈉：分析純。

1.2　溶液配制

對(duì)乙酰氨基酚系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取50.0 mg 對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.4%的氫氧化鈉溶液溶解，并定容至 1 000 mL，搖勻。用移液槍分別移取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL 上述溶液于 50 mL 容量瓶中，用 0.4% 氫氧化鈉溶液定容至標(biāo)線，搖勻，配制成對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度分別為 1，2，4，6，8，10 μg／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。避光保存。

對(duì)乙酰氨基酚樣品溶液：5 μg／mL，精確稱取對(duì)乙酰氨基酚樣品5.0 mg，置于1 000 mL容量瓶中，用 0.4% 氫氧化鈉溶液溶解，并定容至標(biāo)線，搖勻。

1.3　儀器工作條件

（1）差示掃描量熱儀。爐體氣氛：高純氮?dú)?(N2的體積分?jǐn)?shù)不小于 99.99%)，流量為 50 mL／min ；稱樣量：2.0～2.2 mg ；升溫速率：1.0℃／min ；升溫區(qū)間：150～180℃；冷卻裝置：機(jī)械冷卻。

（2）紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。開(kāi)機(jī)，預(yù)熱 10 min，儀器自檢完成后，即可進(jìn)行測(cè)試。

1.4　實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 DSC 儀器校準(zhǔn)

（1）爐子熱電阻、電容的校準(zhǔn)。用高純 N2 吹掃爐體，流量為 50 mL／min，在 –90～400℃范圍內(nèi)，分別以 10℃／min 速率升溫，檢測(cè)空爐子和藍(lán)寶石的DSC 曲線，實(shí)驗(yàn)完成后，軟件自動(dòng)校準(zhǔn)爐子熱電阻和電容，以消除因參比和樣品傳感絲熱電阻和電容的差別引起的實(shí)驗(yàn)誤差。

（2）溫度和爐子常數(shù)校準(zhǔn)。稱取銦標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5.0±0.01) mg，置于 DSC 鋁坩堝中，參比為空坩堝。用高純 N2 吹掃爐子，流量為 50 mL／min，在100～180℃范圍內(nèi)，以 10℃／min 速率升溫，測(cè)定銦的熔化曲線。測(cè)試完成后，軟件自動(dòng)校準(zhǔn)儀器溫度和爐子常數(shù)。

1.4.2　對(duì)乙酰氨基酚純度測(cè)定

稱取 2.0～2.2 mg 樣品于坩堝中，經(jīng)壓樣器壓樣后，按一定次序置于自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品盤(pán)中，采用與樣品坩堝相同類型的空坩堝為參比盤(pán)，自動(dòng)進(jìn)樣器按照設(shè)定的程序依次將樣品與參比送入加熱爐中進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)程序：用高純 N2 吹掃爐子，流量為 50 mL／min，快速升溫至 150℃，恒溫 2 min ，然后以 1.0℃／min 升溫至 180℃ ( 對(duì)乙酰氨基酚熔程為 168～172℃ )。測(cè)試完成后，通過(guò) TA 儀器公司的universal 軟件自動(dòng)計(jì)算其純度。

2　結(jié)果與討論

2.1　升溫速率與稱樣量的選擇

升溫速率和稱樣量是 DSC 法測(cè)定藥品純度的主要影響因素。分別設(shè)置 4 個(gè)水平條件的升溫速率 (0.5，1.0，2.0，4.0℃／min) 和 4 個(gè)水平條件的稱樣量 (1.0～1.2，2.0～2.2，3.0～3.2，4.0～4.2 mg)，在不同水平組合條件下，按 1.4.2 實(shí)驗(yàn)方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，考察不同升溫速率與稱樣量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果見(jiàn)表 1 和圖 1。

圖 1(a) 為稱樣量為 2.0～2.2 mg 時(shí)，不同升溫速率的 DSC 曲線對(duì)比圖，從圖中可以看出，升溫速率越大，樣品與爐體間的熱滯后越明顯，樣品熔融峰越寬，且峰發(fā)生變形 ( 如 4.0℃／min)，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性；升溫速率過(guò)低，不但延長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間，且基線波動(dòng)引起的實(shí)驗(yàn)誤差變大。綜合考慮實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和測(cè)定時(shí)間，選擇升溫速率為 1.0℃／min。 圖 1(b) 為升溫速率為 1.0℃／min 時(shí)，不同稱樣量的DSC 曲線對(duì)比圖，從圖中可以看出，稱樣量對(duì)熔融峰形和測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度及精密度影響不明顯。但稱樣量太少，稱量誤差明顯；稱樣量太多，影響樣品內(nèi)部熱傳導(dǎo)速度及溫度梯度，導(dǎo)致分辨率下降，且造成浪費(fèi)。因此在保證準(zhǔn)確度的前提下，盡量減少稱樣量。最終選擇實(shí)驗(yàn)條件：稱樣量為 2.0～2.2 mg，升溫速率為 1.0℃／min。

2.3　坩堝類型選擇

不同坩堝作為樣品盤(pán)，也會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生一定影響。分別選用 TA 公司的 Tzero 密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)、Tzero 非密封鋁坩堝 (Φ5.4×2.0 mm)、普通非密封鋁坩堝 (Φ6.65×1.7 mm) 和普通密封鋁坩堝 (Φ6×2.5 mm) 作為樣品盤(pán)，稱取 2.0～2.2 mg 對(duì)乙酰氨基酚樣品，對(duì)應(yīng)的空坩堝為參比盤(pán)，在升溫速率為 1.0℃／min 條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2 和圖 2。

由圖 2 可以看出，4 種不同類型坩堝作為樣品盤(pán)測(cè)定的對(duì)乙酰氨基酚的熔融峰形無(wú)顯著差異。但用非密封盤(pán)測(cè)得的樣品純度比密封盤(pán)高，且用非密封盤(pán)測(cè)得的熔融焓偏高，可能是由于采用密封盤(pán)時(shí)，整個(gè)測(cè)定過(guò)程在密封環(huán)境中進(jìn)行，抑制了揮發(fā)性物質(zhì)的揮發(fā)。采用非密封盤(pán)時(shí)，少量揮發(fā)性雜質(zhì)在揮發(fā)過(guò)程中產(chǎn)生汽化熱，導(dǎo)致所測(cè)的熔融焓偏高。為消除汽化熱的干擾，選擇 Tzero 密封鋁盤(pán)作為樣品盤(pán)。

2.4　線性關(guān)系

精確稱取 6 份不同質(zhì)量 (1.0～4.0 mg) 的對(duì)乙酰氨基酚樣品，按 1.4.2 方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表 3。由表 3 可知，6 份對(duì)乙酰氨基酚樣品的純度平均值為 99.92%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.05%。以對(duì)乙酰氨基酚稱樣量 (x) 為橫坐標(biāo)，以熔融熱 (y)( 熔融焓 × 稱樣量 ) 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。計(jì)算得線性方程為 y=181.52x+0.340 2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。表明在對(duì)乙酰氨基酚稱樣量為1.0～4.0 mg 范圍內(nèi)與熔融熱成良好的線性關(guān)系。

2.5　精密度試驗(yàn)

精確稱取 6 份對(duì)乙酰氨基酚樣品 (2.0～2.2 mg)，按 1.4.2 方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表 4。

由表 4 可知，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03%，表明 DSC 法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚純度具有良好的精密度。

2.3　方法比對(duì)試驗(yàn)

按照文獻(xiàn)和《中國(guó)藥典》，采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在257 nm 處的吸光度。以對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度(x) 為橫坐標(biāo)，以吸光度 (y) 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。計(jì)算得線性方程為 y=0.078 6x–0.007 78，相關(guān)系數(shù) r=0.999 9。分別對(duì)樣品溶液進(jìn)行 3 次平行測(cè)定，由線性方程計(jì)算得對(duì)乙酰氨基酚純度分別為99.83%，99.94%，99.79%，平均值為 99.85%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.08%。由此可見(jiàn)，DSC 法與紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定的對(duì)乙酰氨基酚純度具有較好的一致性，且 RSDDSC ＜ RSDUV。

3　結(jié)語(yǔ)

采用差示掃描量熱法測(cè)定了對(duì)乙酰氨基酚原料藥的純度，考察了實(shí)驗(yàn)條件對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，并用紫外可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果表明，DSC 法具有精密度、準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性高等優(yōu)點(diǎn)，且樣品用量少，操作簡(jiǎn)便，不會(huì)造成溶劑浪費(fèi)。DSC 法與紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)得的對(duì)乙酰氨基酚的純度基本一致，且 DSC 法測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小。該方法的建立為對(duì)乙酰氨基酚原料藥純度檢測(cè)和質(zhì)量監(jiān)控提供了一種更加簡(jiǎn)便、快速的分析方法，并為其它原料藥純度的檢測(cè)和質(zhì)量監(jiān)控提供參考。