1、HPLC
HPLC因其分析速度快、靈敏度高、精確度高并能同時(shí)分析多個(gè)化合物被廣泛應(yīng)用于分析檢測各類化合物,也是測定生物胺的最常用方式。由于大部分生物胺沒有熒光和紫外發(fā)色基團(tuán),因此需經(jīng)衍生化后才能測量。常用的衍生化試劑為鄰苯二醛(o-phthalaldehyde,OPA)、丹磺酰氯(dansyl chloride,Dns-Cl)、二硝基苯甲酰氯(dinitro benzoyl chloride,DABS-Cl)、苯甲酰氯(benzoyl chloride)等。Dns-Cl是生物胺HPLC檢測中應(yīng)用最多的衍生試劑,其衍生操作簡單、衍生物穩(wěn)定性好且檢測范圍更廣。利用Dns-Cl衍生化并快速方便地分析奶酪中的生物胺,可大大縮短分析時(shí)間及成本。已經(jīng)利用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測定肉中的生物胺水平,此方法最大的特色是不需要衍生化,HPLC分離后直接利用串聯(lián)質(zhì)譜檢測,靈敏度高而且操作十分簡單,已經(jīng)可以同時(shí)測定10 種未衍生化的生物胺。
2、毛細(xì)管電泳
毛細(xì)管電泳也可以直接對(duì)生物胺進(jìn)行分析而并不需要衍生化處理。以UV為檢測器,利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)無需衍生化就能區(qū)分6 種生物胺,結(jié)合電導(dǎo)檢測可同時(shí)檢測8 種生物胺。當(dāng)以熒光異硫氰酸酯為衍生劑時(shí),8 種生物胺的檢測限可達(dá)10-8 mol/L。
3、生物傳感器法
生物傳感器法是利用酶、抗原、抗體等物質(zhì)作為傳感器的探針,與樣品中的生物胺發(fā)生特異性反應(yīng),通過轉(zhuǎn)換器后檢測信號(hào)的變化,從而對(duì)生物胺進(jìn)行定性和定量分析。較常用的方法是把胺氧化酶固定在探針上,當(dāng)胺氧化酶催化脫去生物胺的氨基后形成過氧化氫,通過測定過氧化氫的量確定生物胺的含量。