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摘要:流動(dòng)相相當(dāng)于液相的血液,可以想象對(duì)液相的重要程度。那么流動(dòng)相都需要注意什么呢?
過(guò)濾溶劑
溶劑在使用前一定要用0.5μm的過(guò)濾器過(guò)濾,如果使用固體化學(xué)試劑(緩沖鹽)配制流動(dòng)相,過(guò)濾特別重要,不能讓固體微粒污染泵,阻塞進(jìn)樣器和柱頭過(guò)濾片。本實(shí)驗(yàn)室有水溶性和脂溶性兩種過(guò)濾膜供選擇(反光面朝上),過(guò)濾水溶性流動(dòng)相時(shí)(如甲醇/水),先用1~2mL甲醇潤(rùn)濕過(guò)濾膜,有助于快速抽濾。
保持儲(chǔ)液瓶的清潔 :用普通溶劑瓶作流動(dòng)相儲(chǔ)液器應(yīng)不定期廢棄瓶子,最后一次應(yīng)用HPLC級(jí)的水或溶劑清洗,不能在清洗過(guò)程中留下污跡。
保證溶劑的質(zhì)量 :一定要用HPLC級(jí)的溶劑,水也應(yīng)達(dá)到HPLC級(jí),同樣也要使用高純度的緩沖鹽。
一些因流動(dòng)相引起的常見(jiàn)問(wèn)題
流動(dòng)相脫氣不充分 :流動(dòng)相受熱,或者流動(dòng)相不同組分混合時(shí)會(huì)有氣體產(chǎn)生,氣泡進(jìn)入泵內(nèi)引起壓力波動(dòng),增加噪音,色譜圖上出現(xiàn)毛刺??稍囉孟铝蟹椒ń鉀Q問(wèn)題:流動(dòng)相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩種方法配合使用;改系統(tǒng)內(nèi)混合為系統(tǒng)外預(yù)混合。
流動(dòng)相供給不暢 :流動(dòng)相用完,管道中吸入氣體引起泵壓力不穩(wěn)。應(yīng)經(jīng)常觀察儲(chǔ)液器中流動(dòng)相的量,加足流動(dòng)相保證所有的樣品分析完畢。輸液管道上裝沉子沉至瓶底,儲(chǔ)液器蓋上留一小孔正好夾住進(jìn)液管,使其不能上下移動(dòng)。
過(guò)濾器阻塞引起管道和泵腔空化,壓力不穩(wěn)。過(guò)濾器被微粒所阻塞或長(zhǎng)霉,去掉過(guò)濾器后如果系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)正常,說(shuō)明已找出問(wèn)題,換上新的過(guò)濾器則可。有時(shí)候換上新的過(guò)濾器仍然不暢,那就需要查查流動(dòng)相的制備過(guò)程,或者換大孔徑的過(guò)濾器。不管如何,流動(dòng)相都需要重新過(guò)濾。流速過(guò)高、阻力大,造成空化現(xiàn)象,這是由于過(guò)濾器孔徑、管道內(nèi)徑、流速和溶劑黏度等引起的。如果流速大于10mL/min,常會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象。
流動(dòng)相和儲(chǔ)液器被污染 :由于污染,噪音越來(lái)越大,檢測(cè)器基線上升。污染物可能被泵以穩(wěn)定的濃度打入系統(tǒng),而再以穩(wěn)定的濃度流出來(lái),所以在色譜圖中不出多余的峰。用梯度洗脫時(shí)弱流動(dòng)相可以使污染物聚在柱頂,流動(dòng)相強(qiáng)度增加后污染物可能被洗脫出來(lái)一個(gè)大的偽峰。有時(shí)基線噪音突然增大或突然提高,都是因?yàn)榉磸?fù)加進(jìn)新的流動(dòng)相或系統(tǒng)用得太久(通宵)所造成的。新加進(jìn)的流動(dòng)相有污染物或者流動(dòng)相長(zhǎng)霉,繁殖了細(xì)菌。
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