2結(jié)果與討論

2.1色譜條件優(yōu)化

采用 DAD檢測(cè)器進(jìn)行190～400 nm全波長(zhǎng)掃描并考察美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的兩種色譜 柱Agilent HILIC色 譜 柱（2.1 mm×100 mm，2.7μm）與Agilent Eclipse XDB–C18色 譜 柱（250 mm×4.6 mm，5μm）對(duì)玉屏風(fēng)散飲片樣品溶液中各成分的分離效果，結(jié)果表明前者分離效果差，后者能實(shí)現(xiàn)主要色譜峰的分離且色譜峰信息較全。參考文獻(xiàn)［11］，以乙腈 –0.05%磷酸水為流動(dòng)相，優(yōu)化梯度洗脫程序，玉屏風(fēng)散飲片樣品溶液中各成分實(shí)現(xiàn)較好分離，所得譜圖基線平穩(wěn)、峰形理想。故最終選擇Agilent Eclipse XDB–C18色 譜 柱 與 乙 腈 –0.05%磷酸水流動(dòng)相。

2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一玉屏風(fēng)散飲片樣品溶液，分別于制備后 0，2，4，8，12，24 h進(jìn) 樣6次 進(jìn) 行 分 析。 按 相同方法分析單品藥材對(duì)照溶液。結(jié)果顯示，各主要色譜峰的保留時(shí)間無明顯變化，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02%～0.18%；色 譜 峰 面 積 相 對(duì) 標(biāo) 準(zhǔn) 偏 差 為0.53%～2.76%（個(gè)別色譜峰略高），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3精密度試驗(yàn)

取同一玉屏風(fēng)散飲片樣品溶液，在 1.2色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行分析。按相同方法分析單品藥材對(duì)照溶液。結(jié)果顯示，各主要色譜峰的保留時(shí)間無明顯變化，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%～0.12%；色譜峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.62%～2.57%，表明方法的精密度良好。

2.4重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批玉屏風(fēng)散飲片，按 1.3方法制備6份樣品溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，各主要色譜峰的保留時(shí)間無明顯變化，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%～0.22%；色譜峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.79%～3%，（個(gè)別色譜略大于3%），表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.5玉屏風(fēng)散飲片樣品溶液的測(cè)定

在 1.2色譜條件下測(cè)定10批玉屏風(fēng)散飲片溶液、標(biāo)準(zhǔn)方劑溶液、空白對(duì)照溶液與單味藥材對(duì)照溶液，色譜分別如圖1、圖2所示。

較色譜圖，確定了22個(gè)共有峰，其中5號(hào)色譜峰與相鄰峰分離度較好且峰面積穩(wěn)定適中，故選其為參照峰（S）。通過與空白對(duì)照溶液及單味藥材對(duì)照溶液指紋圖譜比較，確定玉屏風(fēng)散指紋圖譜中色譜峰的藥材歸屬。各共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積見表3。

將10批玉屏風(fēng)散色譜圖原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2004A）”，以S1為參照譜，利用平均值法計(jì)算相似度，計(jì)算結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，隨機(jī)選取不同來源的10批玉屏風(fēng)散指紋圖譜差異較大，說明市售藥材中化學(xué)成分含量有較大的差異，影響了藥材的品質(zhì)。中國(guó)藥典規(guī)定中藥黃芪有蒙古黃芪與膜莢黃芪兩種正品來源，進(jìn)一步按1.4方法分別制備含蒙古黃芪與膜莢黃芪的標(biāo)準(zhǔn)方劑溶液，建立玉屏風(fēng)散水提液標(biāo)準(zhǔn)圖譜，以S11為參照譜，利用平均值法計(jì)算各批玉屏風(fēng)散指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的相似度，計(jì)算結(jié)果見表5。

由表 5可知，各批玉屏風(fēng)散飲片指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)方劑指紋圖譜相比較，有6批相似度低于0.5，3批在0.5～0.8之間，1批高于0.9。以標(biāo)準(zhǔn)藥材的特征指紋峰為參比，對(duì)市售藥材制備的玉屏風(fēng)散進(jìn)行初步質(zhì)量評(píng)定，隨機(jī)取樣的10個(gè)藥店中，只有一個(gè)藥店所采購(gòu)的藥材質(zhì)量令人滿意。

3結(jié)語(yǔ)

高效液相色譜法具有靈敏度高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)既能從全化學(xué)成分的角度評(píng)價(jià)中藥飲片與復(fù)方，又能體現(xiàn)中醫(yī)整體性的用藥特點(diǎn)，方法簡(jiǎn)便且穩(wěn)定可靠，該技術(shù)在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)等方面的研究中具有重要意義。本次分析結(jié)果證明了飲片對(duì)復(fù)方質(zhì)量的重要影響，藥材生長(zhǎng)條件、炮制方法等均會(huì)影響中藥飲片的質(zhì)量，進(jìn)而影響復(fù)方的質(zhì)量，控制復(fù)方質(zhì)量是保證中藥質(zhì)量穩(wěn)定可控、中醫(yī)治療安全有效的主要措施。因此，應(yīng)將高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于中藥全面研究，明確中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，實(shí)現(xiàn)飲片與方劑的質(zhì)量可控